鰱(Hypophthalmichthys molitrix)IL-10基因的克隆及表達分析

白細胞介素10(IL-10)是一種作用廣泛的抗炎細胞因子,主要功能是限制和最終終止炎癥反應.用RACE(rapid amplification of cDNA ends)-PCR方法擴增出鰱白細胞介素10(IL-10)的cDNA,其全長為1248nt,包含5'非編碼區(qū)156nt,3'非編碼區(qū)552nt,開放閱讀框540nt.鰱IL-10的開放閱讀框編碼179個氨基酸,其中包含構成兩對二硫鍵的4個保守半胱氨酸.RT-PCR結果顯示鰱IL-10mRNA主要在脾臟、鰓、頭腎和肌肉中表達.將鰱IL-10完整開放閱讀框克隆到原核融合表達載體pET-32a-c(+)上,轉入大腸桿菌Rosetta-gami(DE3)內進行表達,經(jīng)SDS-PAGE電泳后顯示重組融合蛋白在分子量約39 ku處有明顯表達帶,與預期分子量大小一致,且主要以不可溶的包涵體形式存在.變性條件下利用His·Bind樹脂成功純化了融合蛋白,將其免疫家兔,獲得兔多克隆抗鰱IL-10抗體,Western blot檢測到兔多克隆抗鰱IL-10抗體可有效地與重組蛋白結合.這些結果為進一步研究IL-10的功能奠定了基礎.

作 者： 肖凡書 昌鳴先 孫軍 肖調義 聶品   作者單位： 肖凡書(湖南農(nóng)業(yè)大學動物科技學院,長沙,410128;中國科學院水生生物研究所,淡水生態(tài)與生物技術國家重點實驗室,武漢,430072)

昌鳴先,聶品(中國科學院水生生物研究所,淡水生態(tài)與生物技術國家重點實驗室,武漢,430072)

孫軍(暨南大學水生生物研究所,廣州,510632)

肖調義(湖南農(nóng)業(yè)大學動物科技學院,長沙,410128) 

刊 名： 自然科學進展  ISTIC PKU 英文刊名： PROGRESS IN NATURAL SCIENCE  年，卷(期)： 2006 16(2)  分類號： Q95  關鍵詞： 鰱   IL-10   克隆   組織表達   原核表達  

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